熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) : 熒光顯微鏡是以紫外線為光源, 用以照射被檢物體, 使之發(fā)出熒光, 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。
熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。 細(xì)胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。
熒光的原理是某些物質(zhì)會在高強度的短波長光線照射下,會發(fā)出波長稍長的發(fā)射光(熒光)。
而我們一般都是觀察被激發(fā)熒光基團所發(fā)射出來的波長稍長的發(fā)射光(熒光)。
但是激發(fā)的光會很強,所以我們就需要把激發(fā)的光全部濾去,這樣才可以看到熒光基團的發(fā)射光(熒光)。
熒光顯微鏡一般都用高強度的汞燈做激發(fā)光源。使用濾色片把不需要的光濾去,只留下激發(fā)熒光集團的高強度很純的光線。這個單色的光線通過物鏡照射到樣本上之后,樣本會被激發(fā)出發(fā)射光(熒光),熒光和激發(fā)光都會沿著物鏡光路返回,這樣的話,就需要用一個二相色鏡把激發(fā)光濾去,只讓我們需要看到的熒光透過。
這個熒光沿著顯微鏡的光路*后到達(dá)目鏡下,然后進(jìn)入我們的眼睛,我們就可以看到熒光基團所發(fā)出來的熒光了。
注:在熒光顯微鏡中,核心的是 1 熒光光源,因為熒光需要高強度的光才可以被激發(fā)出來,我們一般都用汞燈,另外還有長壽命金屬鹵素?zé)簦?dāng)然還有激光。2 激發(fā)塊(幾個濾色塊組成的組件,一般有激發(fā)光濾色片、二相色鏡、發(fā)射光濾色片),因為我們的熒光基團都是在特定波長的光線下才可以激發(fā),并且被激發(fā)的發(fā)射光也具有特定波長。所以需要選擇合適的激發(fā)塊(主要是選擇激發(fā)光濾色片、二相色鏡、發(fā)射光濾色片這三個的可以通過的光線波長等參數(shù))。
另外物鏡也對熒光顯微鏡有很大影響。因為只有高檔次的物鏡才可以提供完好的色差矯正。